倒置顯微鏡是為了適應(yīng)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的組織培養(yǎng)、細(xì)胞離體培養(yǎng)、浮游生物、環(huán)境保護(hù)、食品檢驗等顯微觀察。由于這些活體被檢物體均放置在培養(yǎng)皿(或培養(yǎng)瓶)中，這樣就要求倒置顯微鏡的物鏡和聚光鏡的工作距離很長，能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進(jìn)行顯微觀察和研究。因此，物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來，故稱為"倒置顯微鏡"。倒置顯微鏡多用于無色透明的活體觀察，在倒置顯微鏡的基礎(chǔ)上添加一套熒光附件:激光激發(fā)塊，熒光光源，熒光照明器，激發(fā)塊切換裝置，即可進(jìn)行倒置熒光觀察。
倒置熒光顯微鏡的使用操作
1.明視野觀察的正確使用。倒置熒光顯微鏡的功能之一是明視野觀察，其基本原理是標(biāo)本經(jīng)光線照射后，各部分對光吸收的不同而在明亮的背景中實現(xiàn)成像，主要適用于經(jīng)染色或本身具有顏色的細(xì)胞、組織切片等標(biāo)本的觀察。
2.相差觀察的正確使用。倒置熒光顯微鏡的功能之二是相差觀察，其基本原理是將樣本不同部分的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?，?jīng)過帶有相位片的相差物鏡和帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡實現(xiàn)觀測，主要適用于活細(xì)胞或不染色的組織切片觀察,在實驗教學(xué)過程中，除了正確引導(dǎo)醫(yī)學(xué)研究生遵守相差觀察的基本操作方法，同時更為重要的是引導(dǎo)他們對使用相差觀察的標(biāo)本認(rèn)識和掌握。對他們來說，在日后的科學(xué)研究中，尤為常用的是培養(yǎng)細(xì)胞的顯微觀察。首先，對于細(xì)胞器材的選擇，一般建議使用玻璃材質(zhì)和塑料材質(zhì)的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板和培養(yǎng)瓶。它們多為無色透明，可直接在倒置熒光顯微鏡上進(jìn)行觀察，不用倒掉細(xì)胞液和經(jīng)過其他處理。其次，在進(jìn)行顯微觀察中，不要隨意打開器材的蓋子，以免污染細(xì)胞。最后，對于操作人員來說，需佩戴手套、口罩和白大衣，不僅可以保護(hù)自身健康而且可以防止細(xì)胞污染。
3.熒光觀察的正確使用。倒置熒光顯微鏡的功能之三是熒光觀察，其基本原理是利用激發(fā)光激發(fā)樣本產(chǎn)生熒光，從而實現(xiàn)樣本的形狀與定位觀察，主要適用于熒光標(biāo)記樣本的觀察。熒光觀察是倒置熒光顯微鏡的重要功能，其配件昂貴且使用特殊。要想醫(yī)學(xué)研究生正確地掌握熒光觀察的操作使用規(guī)范，教師除了教會他們掌握基本的操作方法，同時更為重要的是教會他們掌握它的特殊性。首先，在標(biāo)本制作中，載玻片和蓋玻片應(yīng)表面光潔且厚度適宜(載玻片在0.8mm~1.2mm之間，蓋玻片在0.17mm左右)；標(biāo)本應(yīng)厚度適宜，同時避免細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蓋；封裱劑應(yīng)使用甘油和碳酸鹽緩沖液(0.5mol/L PH9.0～9.5)的等量混合液。其次，在熒光觀察前，應(yīng)關(guān)閉房間內(nèi)的電燈和倒置熒光顯微鏡的白光，確保處于暗室環(huán)境。最后，在熒光觀察中，應(yīng)嚴(yán)格控制觀察時間，一般以1~2小時/次為宜，否則熒光會出現(xiàn)衰減和消失的現(xiàn)象；調(diào)整光源時應(yīng)佩戴防護(hù)眼鏡，避免紫外線對眼鏡的傷害。
4.圖像拍攝的正確使用。在科學(xué)研究中，不僅要求倒置熒光顯微鏡可以實現(xiàn)多種觀察，而且要求倒置熒光顯微鏡可以實現(xiàn)圖像拍攝。倒置熒光顯微鏡系統(tǒng)通過光電轉(zhuǎn)換將光學(xué)顯微鏡與計算機(jī)結(jié)合在一起，不僅可以在目鏡上進(jìn)行顯微觀察，而且可以在計算機(jī)上進(jìn)行實時動態(tài)圖像的觀察、編輯和保存。
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